Catalog: C00039

Size    : 100mL

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产品简介：

 GUS(β-Galactosidase)基因是存在于E.coli等一些细菌基因组内的编码β-葡萄糖苷酸酶的一种水解酶，该基因常作为融合标记用于植物转基因分析和调控研究中。GUS受体基因系统有表达E.coli GUS 酶的稳定性和在植物内的低活性，绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，以β-葡萄糖苷酸脂类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。5-Bromo-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide，cyclohexylammonium salt(简称为X-Gluc或X-GlcA)分子量为521.8，CAS号为18656-96-7，是检测大肠杆菌中GUS基因的底物，可快速检测植物中基因融合标记。

β-葡萄糖苷酶基因染色试剂盒(β-Galactosidase Reporter Gene Staining Kit)简称为GUS染色液，其染色原理是适宜的反应条件下，β-葡萄糖苷酶(GUS)可将X-Gluc水解成蓝色物质，该物质不溶解于转基因的细胞核组织中的靛蓝物质，具有GUS活性的部位或点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。GUS染色液多用于转基因植物的GUS基因表达分析。该试剂仅用用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：

1、  无水乙醇、甲醇；

2、  去离子水；

3、  小瓶或多孔板、显微镜。

操作步骤（仅供参考）：

1、配制X- GlcA Solution：取X-GlcA solvent 229μl加入至80mg X-GlcA中或取适量上述2种物质溶解，使其浓度达到350mg/ml，轻轻Vortex混匀，即为X- GlcA Solution，分装后，-20℃避光保存。

2、按下列比例配制GUS染色液：

3、  固定(固定不是必须的步骤，如果不需要固定，直接进行操作步骤4)：

① 取转基因植物组织，加入到3-5ml左右清洁小瓶或多孔板中。

②取适量2×Fixation Buffer与去离子水等量稀释即获得1×Fixation Buffer。加入1×Fixation Buffer，使Fixation Buffer完全浸没组织。室温孵育45min，弃液。

③ 配制洗涤液： 按GUS Buffer A:去离子水=1:20稀释，即为洗涤液。用配制好的洗涤液漂洗3次。每次1min。

4、加入适量GUS染色液，使GUS染色液完全浸没组织。

5、用真空泵抽取小瓶或多孔板中的气体，抽取时间应大于2min。该步骤是为了抽取植物组织内的气体，并使染色液更容易进入组织内。

6、立即盖紧瓶子或多孔板，37℃孵育24h。随着孵育时间的延长，蓝色渐渐出现，当表达量较高时，GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点。

7、用乙醇脱去样本的叶绿素，一般样本浸没于乙醇1-3h。如有必要可重复该脱色步骤，以便彻底清除叶绿素。样本保存于乙醇中，可用肉眼或普通光学显微镜下观察。

注意事项：
1、配制好的GUS染色液可以4℃避光保存半个月。

2、X-GlcA Solution应避免反复冻融，否则染色效率会下降。

3、由于组织特异性等原因，蓝色颜色反应可能不完全一致，应注意摸索具体实验条件。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。