产品及特点

本酵母化学感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理，高效快速制备酿酒酵母化学感受态细胞，用于长期冻存以备后续转化的产品，它具有下列特点：

1.         一次制备，-80℃保存，多次使用，免去每次转化都要制备酿酒酵母感受态细胞。

2.         操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要30分钟

3.         主要用于酿酒酵母S. cerevisiae，也适用于其他多种实验用酵母菌株，包括S. pombe、C. albicans、Pichia pastoris等。

4.         受体酵母可以不含质粒，也可用于携带有选择性质粒的酵母（如双杂交体系中的酵母）。

5.         对酿酒酵母，最高转化效率可达到0.2-1×10⁵个转化子/ug质粒DNA。对其他酵母，效率稍低，范围在100-2000个转化子/ug质粒DNA。

6.         得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒DNA进行转化，例如YIp, YRp, YCp, YEp和YAC等。

7.         可以用于酵母双杂交、定点突变（Site－Directed Mutagenesis）、基因破坏（Gene Disruption）、等位突变基因修复（Mutant Allele Recovery）等实验。

8.         本产品可以制备20只酵母感受态细胞（需要200mL酵母培养液），其中A型只用于制备感受态细胞，B型还带高效转化液。

规格及成分

自备试剂

YPD培养基

运输及保存

常温运输和保存，有效期一年。

使用方法

一：酵母化学感受态细胞的制备

说明：按本方法制备1管酵母化学感受态细胞就需要OD600达到0.6-1.0的新鲜酵母培养液10 mL，用户需根据所需酵母感受态细胞的数量决定培养细胞的体积。如果超过10 mL，则制备液的使用量需要按比例增加。

1、  挑取酵母受体菌的新鲜的单菌落（4℃放置不超过3周的也可以），接种到装在50mL 离心管中的10 mL的自备的YPD培养基中。

2、  30℃摇晃培养，摇床速度250 rpm/分钟，直到OD600达到0.6-1.0（相当于0.6-1×10⁷细胞/mL）。

3、  室温3000rpm离心5 min，弃上清得酵母细胞沉淀。

4、  新鲜制备适量的酵母感受态制备工作液。对10 mL酵母需要5.25 mL的工作液，其配制方法是：将4.75 mL制备液A、0.25 mL制备液B和0.25 mL制备液C加入到一个无菌的离心管中后充分震荡混匀即可。酵母感受态制备工作液可放室温待用。

5、  用0.5倍体积的新鲜配制的酵母感受态制备工作液洗涤酵母细胞沉淀一次（对10 mL酵母则需要5 mL酵母感受态制备工作液）。即混合后振荡1分钟，室温3000rpm离心3分钟，去上清得洗涤后的酵母细胞沉淀。

6、  再用0.02倍体积的酵母感受态制备工作液充分重悬菌体（对10 mL酵母，则需要0.2 mL酵母感受态制备工作液）。

7、  按每管0.2 mL分装到冷冻管中，放入保温冰盒中冷却半小时后再放入-80℃冰箱待用。0.2 mL的感受态细胞足够1次转化使用。注意：放入保温冰盒的目的是使温度缓慢下降，急冻将使转化效率降低，这点跟大肠杆菌感受态制备过程不同。

二：化学转化酵母感受态细胞（只有B型提供相关试剂）

1.     将总体积不超过20 uL的0.1-5 ug质粒DNA加到刚从-80℃冰箱取出的、还处于凝固状态的0.2 mL酵母感受态细胞上。注意：最好同时做一个不加质粒DNA的阴性对照组。

2.     室温充分振荡直到凝固的感受态细胞完全融化。注意：此步非常关键，如果能在恒温振荡器上37℃振荡5分钟，则效果更好。

3.     加入1.4mL转化液A，轻柔颠倒混匀一分钟。

4.     30℃培养1小时。

5.     室温3000g离心5秒，弃上清。

6.     在酵母细胞沉淀中加1.0 mL 转化液B，振荡一分钟。

7.     室温3000g离心5秒，弃上清。

8.     在酵母沉淀细胞中加入适量（如100 uL）的转化液B，混匀后在在选择培养基上全部涂盘。

9.     30℃培养3-5天后即得酵母转化菌落。

相关产品

酵母电转感受态细胞制备试剂盒，裂殖酵母感受态细胞制备试剂盒。