谷胱甘肽 S-转移酶（glutathione S-transferase，GST）试剂盒
分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号：P00042
规格：50T/48S
产品内容：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加5 mL 蒸馏水溶解。
产品说明：
GST 是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质内。GST 是体内解
毒酶系统的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与GSH 的巯基共价结
合，使亲电化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备
毒性的物质降解并排出体外的目的。因此，GST 在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中
发挥着重要的生物学功能。此外，因为GST 具有GSH-Px 活性，亦称为non-Se GSH-Px，
具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质等的功能。注意，GST 催化的反应减少GSH
含量，但是不增加GSSG 含量。
GST 催化GSH 与CDNB 结合，其结合产物的光吸收峰波长为340nm；通过测定
340nm 波长处吸光度上升速率，即可计算出GST 活性。
自备仪器和用品：
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL 石英比色皿和蒸馏
水。
操作步骤：
一、 粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组
织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1 的比例
（建议500 万细胞加入1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3
秒，间隔7 秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待
测。
3. 血清等液体：直接测定。
二、 测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，用蒸馏水调零。
2. 试剂三放在25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）保温。
3. 空白管：取1mL 石英比色皿，加入100μL 试剂一，900μL 试剂二和100μL 试剂三，迅
速混匀后于340nm 测定吸光度变化，记录10 s 和310 s 吸光度为A1 和A2。
4. 测定管：取1mL 石英比色皿，加入100μL 上清液，900μL 试剂二和100μL 试剂三，迅
速混匀后于340nm 测定吸光度变化，记录10 s 和310 s 吸光度为A3 和A4。
注意：空白管只需测定一次。
三、GST 活性计算公式：
(1) 按蛋白浓度计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分钟催化1nmol/L CDNB 与GSH
结合为1 个酶活单位。
GST（nmol/min/mg prot）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×109×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T
=230×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr
(2) 按样本质量计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每克样品每分钟催化1nmol/L CDNB 与GSH 结
合为1 个酶活单位。
GST（nmol/min/g）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×109×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T
=230×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W
(3) 按细胞数量计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每104 个细胞每分钟催化1nmol/L CDNB 与
GSH 结合为1 个酶活单位。
GST（nmol/min/104 cell）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×109×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V
样总)÷T =230×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫升液体每分钟催化1nmol/L CDNB 与GSH
结合为1 个酶活单位。
GST（nmol/min/mL）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×109×V 反总÷V 样÷T
= 230×[(A4－A3)－(A2-A1)]
ε：产物摩尔消光系数，9.6×103 L/mol /cm；d：比色皿光径，1cm；106：1mol=1×
106μmol；V 反总：反应体系总体积，1100μL=0.0011 L；Cpr：上清液蛋白质浓度
（mg/mL），需要另外测定，建议选用本公司生产的BCA 蛋白质浓度测定试剂盒；V
样：加入反应体系中上清液体积，100μL=0.1 mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W，
样本质量，g；T：反应时间（min），5min。
注意事项：
1. 样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力；
2. 细胞中GST 活性测定时，细胞数目须在300 万-500 万之间，细胞中GST 的提取时可
加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞；
3. 本法测定GST 活性的线性范围可达76 μmol/min /L，测定前先用1～2 个样做预实验，
如5min 内反应不成线性，须对样品用蒸馏水稀释，计算结果乘以稀释倍数；
4. 测定反映的温度对测定结果有影响，请控制在25℃或者37℃（哺乳动物）。