Catalog: GST007 

Size    : 50uL X 10支

Part   ：

产品简介：

E. coli DH5α Electro-Cells是EBT systems 特别制备的适用于电穿孔法的制品。用高电压脉冲电流瞬间击穿细胞的细胞质膜，从而使外源DNA转入宿主细胞的转化方法称为电穿孔法。通过此种方法制备的感受态细胞转化效率高、产量大，尤其适合在短时间内将少量样品转入大肠杆菌内。
     E.coli DH5α在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时，利用β-半乳糖苷酶活性 (α-互补性) ，应用蓝白斑方法可以很容易鉴别重组体菌株。由于菌株无lacl q，故不需要IPTG。因此，当制作基因文库或进行亚克隆时，可以使用X-Gal筛选重组DNA或重组质粒。

X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside

使用方法：

1. E. coli DH5α Electro-Cells（50 μl）使用前在冰上融化。

2. 在融化的细胞中加入 1～2 ul DNA 溶液*1。

3. 将 Electro-Cell 及 DNA 混合液注入到冰中预冷的 0.1 cm 电转杯内（Cuvette）。

4. 电压冲击*2 后，迅速置于冰中冷却，加入 1 ml SOC 培养基（冰中预冷）。

5. 37℃振荡培养 1 小时（160～250 rpm）。

6. 取适量涂布选择培养基。直径为 9 cm 的平板涂布量不超过 100 ul。

7. 37℃过夜培养。

. 当 DNA 溶液中有盐存在时，用 TE buffer 或灭菌水稀释，也可用乙醇沉淀脱盐（建议＜10ng ）。使用 EBT systems DNA Ligation Kits 制备的 DNA 样品时，需要乙醇沉淀纯化。  

‚.EBT systems 使用 BIO-RAD MicroPulser，电压为 1.5 kV。当使用 BIO-RAD Gene Pulser 时， 标准设置为 200 Ω，25 uF，1.5 kV。

注意事项：

1. 将 Electro-Cells 从-80℃取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。

2. 当使用 50 μl Electro-Cells 时，添加不多于 10 ng 的高纯度样品 DNA。否则会降低转化效率。

3. 导入分子量较大的 DNA（>7kb）时，转化效率稍低。

4. 当改变实验规模时，适当改变反应条件。

5. L-broth 或 φ b-broth 可代替 SOC 培养基。此时，转化效率会降低。

  L-broth：10 g Bacto tryptone, 5 g Bacto yeast extract, 5 g NaCl/1 L water，用 1 N NaOH 调整 pH7.5 左右并高压灭菌。

b-broth：5 g Bacto yeast extract, 20 g Bacto tryptone, 5 g MgSO4·7H2O/1 L water， 用 1 N KOH 调整 pH7.5 左右并高压灭菌。

6. 稀释时，使用“使用方法 4”中加入培养基。

7. 当使用 X-Gal 时：

将20 mg/ml X-Gal（溶解于二甲基甲酰胺）按200-300 μl/100 ml 的比例加入到agar medium 中。

8. DH5α 可作为 M13mp 载体的复制。但由于不携带 F 因子，因而不能形成菌斑。

9. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅 速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。