产品详情
- 产品编号
- ART037
- 产品名
- Paragon RT reagent Kit (For Real Time)
- 所属类别
- PCR
- 规格
-
# 单位 价格 1 200次 1980.0 元
尊敬的客户,感谢您选用本公司的产品。使用前请仔细阅读说明书.
仅供科研使用，不适用于临床诊断。
简介：
本制品是Real Time RT PCR 用的理想反转录反应试剂。使用具有较强延伸能力的 PrimeScript RTase可以在较短时间内高效合成 Real Time PCR 用 cDNA ，操作简单，适合进行高通量分析。进行 2 Step RealTime RT PCR 反应时，可选用其他qPCR Mix试剂配合使用，适合进行高性能的基因表达分析。本制品提供染料分析法和探针分析法各自适合的反应体系，可以根据分析方法选择体系。
制品内容：
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1. 5×PrimeScript Buffer （for Real Time ）*1 |
40 μl |
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2. PrimeScript RT Enzyme Mix I *2 |
10 μl |
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3. Oligo dT Primer （50 μM ） |
10 μl |
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4. Random 6 mers （100 μM ） |
40 μl |
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5. RNase Free dH2O |
100 μl |
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6. EASY Dilution （for Real Time PCR） *3 |
100 μl |
*1：含有 dNTP Mixture 和 Mg 2+ 。
*2：含有 RNase Inhibitor 。
*3：用于制作标准曲线时梯度稀释 total RNA 和 cDNA 。
保 存： -20℃。
操作步骤：
反转录反应
【 染料分析法 】
1. 按下列组份配制 RT 反应液（反应液配制请在冰上进行）。 为了保证反应液配制的准确性减少分装时造成的误差，应按照比实际用量稍大的体积配制反应液，最后加入RNA样品。
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试剂 |
使用量 |
终浓度 |
|
5×PrimeScript Buffer （for Real Time ） |
2 μl |
1× |
|
PrimeScript RT Enzyme Mix I |
0.5 μl |
|
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Oligo dT Primer （50 μM ）*1 |
0.5 μl |
25 pmol |
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Random 6 mers （100 μM ）*1 |
0.5 μl |
50 pmol |
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Total RNA |
≤ 500 ng*2 |
|
|
RNase Free dH2O |
up to 10 μl |
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*1：Random 6 mers和 Oligo dT Primer 同时使用，可有效地将全长 mRNA 反转录成 cDNA 。
*2：应体系可按需求相应放大， 10 μl 反应体系可最大使用500 ng 的 Total RNA 。
2. 轻柔混匀后进行反转录，反应条件：37℃孵育15 min 进行反转录反应，85℃下5 sec 使反转录酶失活，4℃保存。
注意： 得到的 RT 反应液加入到下一步的 Real Time PCR 反应体系中，其加入量不要超过 Real Time PCR 反应体积的 （1/10 V/V）量。
【 探针分析法 】
1. 按下列组份配制 RT 反应液（反应液配制请在冰上进行）。 为了保证反应液配制的准确性减少分装时造成的误差，应按照比实际用量稍大的体积配制反应液，最后加入 RNA 样品。
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试剂 |
使用量 |
终浓度 |
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5×PrimeScript Buffer （for Real Time ） |
2 μl |
1× |
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PrimeScript RT Enzyme Mix I |
0.5 μl |
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Oligo dT Primer （50 μM ）*1 |
0.5 μl |
25 pmol |
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Random 6 mers （100 μM ）*1 |
2 μl |
200 pmol |
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Total RNA |
≤ 1 μg *2 |
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RNase Free dH2O |
up to 10 μl |
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*1：Random 6 mers和 Oligo dT Primer 同时使用，可有效地将全长 mRNA 反转录成 cDNA 。
*2：应体系可按需求相应放大， 10 μl 反应体系可最大使用1 μg的 Total RNA 。
2. 轻柔混匀后进行反转录，反应条件：37℃孵育15 min 进行反转录反应，85℃下5 sec 使反转录酶失活，4℃保存。
注意： 得到的 RT 反应液加入到下一步的 Real Time PCR 反应体系中，其加入量不要超过 Real Time PCR 反应体积的 （1/10 V/V）量。
